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探究胚胎干细胞培育全过程
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www.china-korea.org 2005-12-23 来源：韩联社
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韩联社首尔１２月２３日电 干细胞是指人体内能够被培育成所有人体组织和、骨、大脑、肌肉、皮肤等器官的万能细胞。
干细胞大体上分为通过受精卵和克隆体细胞的方式被培育的“胚胎干细胞”和存在于成熟组织和器官中的“成体干细胞”。
黄禹锡科研组在论文中说：“将从患者身上提取的体细胞（卵丘细胞）植入摘除核的卵子中，将其培育成了核移植卵子。通过电磁刺激，使核移植卵子细胞融合，最后使该卵子发育成胚泡（克隆胚胎）。”
进行电磁冲击的目的在于，使２ｎ的体细胞基因进入空卵子当中，开始进行分裂。
这相当于精子进入卵子中，使卵子产生“错觉”。
卵子将分化成球状“内细胞群”和形成胎盘的“营养胚叶细胞”。而在内细胞群中可以提取治疗用干细胞。
从分离内细胞群到确立胚胎干细胞的胚泡阶段叫“治疗用克隆”。如果将胚泡阶段的卵子植入子宫，将是“可以生殖的人体克隆”。
一个受精卵分裂成两个细胞时，两个细胞可能分化成两个新生命，即同卵双胞胎。与同卵双胞胎的原理相同，一般情况下，处于受精卵分裂初期的万能干细胞分裂后，每个细胞都有可能成为新胎儿。在用于研究时可能引发巨大的伦理争议。
尽管如此，科学家仍然专注于胚胎眼细胞的研究。这是由于在治疗脑疾病、糖尿病、老年痴呆症和帕金森氏病等疾病时可以利用干细胞。
培育胚胎干细胞的方法包括，克隆体细胞和以治疗不孕为目的、通过体外受精获得胚胎。
在这两个过程中，都可以将胚胎培育成胚泡（受精后４～５天）后，并从位于里面的内细胞群中培育胚胎干细胞。
从胚胎发育成胚泡后，需要单独分离出内细胞群，此时有免疫学分离法和机械分离法。
免疫学分离法是指利用可识别细胞表面的抗体处理胚泡后，添加可选择性地只溶解同抗体结合的细胞的补体，从胚泡中只留下里面的内细胞群的分离方法。
机械分离法是指利用可做精细手术的注射针，直接将内细胞群以外的部分分离的方法。
此后，被分离的内细胞群的分化能力被抑制，并将其培养在只能进行细胞增殖的环境中。此时使用的支持细胞不会自我增殖，但可以帮助胚胎干细胞抑制分化及增殖。
细胞增殖后，形成具有适当大小和密度的群落，则再利用机械方法分离成更小的细胞群落，并将这些小群落培养在相同条件下的新培养皿。如此分离细胞，一代一代培养的方式称为“传代培养”。
据传，黄禹锡科研组每五六天做一次传代培养。
如果胚胎质量好，一周后可进行分成２～３个的第一次传代培养，两周后重复这一过程。根据内细胞群的质量，传代培养的时间有所不同，但是不超过两周。
继续重复这一方式的传代培养后，可以培养很多的胚胎干细胞，并加以维持。
但是，到这一步还没有完成胚胎干细胞。这是由于在传代培养的过程中需要培育出无限细胞系（Ｉｎｆｉｎｉｔｅ Ｃｅｌｌ Ｌｉｎｅ）。
通常，普通细胞最多进行５０～６０次分裂。而在此过程中，细胞因为染色体末端老化而死去，但干细胞通过反复恢复染色体末端不会死去，并发育成细胞株。
这时形成的胚胎干细胞株，在一定条件下具有被分化为特定细胞的特性。“一定条件”是指人为地遏制其分化，或使其恢复重新分化的能力。到这一阶段，通常需要４～６周。
此后，应该对通过上述过程培育的胚胎干细胞进行验证。具体包括，在胚胎干细胞成长阶段，在特异情况下出现的抗原被染色时，对出现的一些情况进行确认，包括：抗原是否显现、是否有４６个染色体以及是否出现畸胎瘤等。
如果给诱发免疫缺乏症的老鼠（ＳＣＩＤ ｍｏｕｓｅ）注入胚胎干细胞，形成畸胎瘤才算恢复正常，但要确认该情况，通常需要１２周左右。
专家们认为，从克隆体细胞到培育胚胎干细胞，大约需要４～５个月左右。
如果这一过程结束，将经历以冷冻保存的方法，长期保管已确认胚胎干细胞特性的细胞。胚胎干细胞在未分化状态下，难以维持增殖，因此需要在维持细胞群形态的情况下进行冷冻。这时候需要在冷冻保护溶液发挥均匀作用的条件下，用液体氮进行快速冷冻。（完）
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